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分子生物学及常用技术第五章测试_智慧树知到答案2021年

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第五章分子生物学技术：要了解细胞的遗传过程就需要各种具有挑战性的实验方法。这些方法包括可从细胞的无数混合物中分离出单个大分子，以及将基因组解剖成大小合适的片段以便操作，以及分析特定DNA序列的方法等等；这些方法成功也是分子生物学领域的主要推动力之一。5.1DNA序列分析技术:DNA序列分析是进行基因的精细结构和功能分析、绘制基因图谱、转基因检测的重要手段。DNA序列测定主要是在DNA内切酶、合成酶的应用，高分辨率聚丙烯酰胺变性凝胶电泳技术等基础上建立起来的。用于测序分析的方法有Sanger（1977）的双脱氧链末端终止法和Maxam与Gilbert（1977）的化学降解法两种。本节分别讨论了两种方法的原理。
5.2核酸杂交技术:由于DNA双链在变性后可以重新按碱基互补配对进行复性，因此，在适当的离子强度和温度条件下，互补的核苷酸序列（DNA与DNA、DNA与RNA、RNA与RNA等）通过Watson-Crick碱基配对形成非共价键，从而形成稳定的同源或异源双链分子的过程，称为核酸分子杂交技术，又称核酸杂交。杂交通常在一支持膜上进行，因此又称为核酸印迹杂交。根据检测样品的不同又被分为DNA印迹杂交（Southern blot hybridization ）和RNA印迹杂交（Northern blot hybridization）。
5.3质粒DNA的提取及电泳检测:粒是细菌、酵母菌等生物钟染色体之外的DNA，可自主复制和遗传的闭合环状双链DNA分子。质粒也是基因工程中最常见的载体。质粒抽提方法即去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。
5.4琼脂糖凝胶电泳:琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速率向正极方向移动。
5.5PCR扩增目的基因:聚合酶链式反应简称PCR（Polymerase Chain Reaction） (又称：多聚酶链式反应) PCR是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
5.6感受态细胞的制备与转化:将大肠杆菌细胞制备成抑郁接受外源DNA分子，且不易被细胞内限制性内切酶分解的感受态细胞状态，其原理可能是破坏了细胞膜的通透性。感受态细胞接受质粒的过程就称为转化。实验室中可以通过简单的低温CaCl2处理使大肠杆菌转变为感受态细胞，并通过热击方式将质粒转化进入感受态细胞。
5.7动物组织总RNA的提取:核酸提取的一般原则主要包括：破碎细胞-消化蛋白质-去除其他核酸-沉淀核酸。总RNA是细胞中所有RNA，可用于分析mRNA、miRNA等。