第四章 核酸定量检测技术:1996年,美国Applied Biosystems公司首次推出实时荧光定量PCR技术,所谓实时荧光定量PCR技术。本章将介绍如下内容:实时荧光定量PCR技术的基本原理,引物、探针的设计基本原则,实时荧光定量PCR相关结果的分析方法,实时荧光定量PCR反应体系和条件的优化。4.1实时荧光定量PCR的基本原理:实时荧光定量PCR的原理及常用的概念--介绍实时荧光定量PCR中常用的概念;PCR扩增的理论模式。荧光染料技术和荧光探针技术--介绍实时荧光定量PCR中的荧光化学物质及两种实时荧光定量PCR技术荧光染料技术和荧光探针技术
4.2实时荧光定量PCR引物和探针的设计原则:实时荧光定量PCR引物和探针的设计原则--介绍实时荧光定量PCR引物设计的基本原则和探针设计的基本原则。
4.3实时荧光定量PCR测定的数据分析:实时荧光定量PCR测定的数据分析--介绍实时荧光定量PCR测定的数据分析,两种方法相对定量和绝对定量。
4.4实时荧光定量PCR的实验操作:实时荧光定量PCR的实验操作--介绍实际的实时荧光定量PCR操作过程。
4.1实时荧光定量PCR的基本原理:实时荧光定量PCR的原理及常用的概念--介绍实时荧光定量PCR中常用的概念;PCR扩增的理论模式。荧光染料技术和荧光探针技术--介绍实时荧光定量PCR中的荧光化学物质及两种实时荧光定量PCR技术荧光染料技术和荧光探针技术
4.2实时荧光定量PCR引物和探针的设计原则:实时荧光定量PCR引物和探针的设计原则--介绍实时荧光定量PCR引物设计的基本原则和探针设计的基本原则。
4.3实时荧光定量PCR测定的数据分析:实时荧光定量PCR测定的数据分析--介绍实时荧光定量PCR测定的数据分析,两种方法相对定量和绝对定量。
4.4实时荧光定量PCR的实验操作:实时荧光定量PCR的实验操作--介绍实际的实时荧光定量PCR操作过程。
[单选题]关于TaqMan探针技术的描述,不正确的是(  )
无需进行寡核苷酸熔解曲线分析,减少了实验时间
操作亦比较简单
易受到Taq DNA聚合酶5′-3′核酸外切酶活性的影响
解决了荧光染料技术非特异的缺点
R基团与Q基团相距较远,淬灭不彻底,本底较高
答案:操作亦比较简单
[单选题]以下为比较Ct法的相对定量的描述,不正确的是(  )。
没有考虑PCR扩增效率对定量结果的影响
使机体的不同组织,以及不同实验处理组之间的基因表达的变化具有可比性
运用了数学公式来计算相对量
实验条件无需严格优化
无需再对看家基因和目的基因做标准曲线[单选题]SYBR Green Ⅰ技术常要求扩增片段不大于()。
400bp
100bp   
50bp
200bp
300bp[单选题]TaqMan探针技术要求扩增片段应在() 
50~150bp    
150~200bp   
200~250bp   
250~300bp   
300~350bp[单选题]下列关于real-time PCR引物设计的原则中,不正确的是(  )
反应体系中引物的浓度一般在0.1~0.2μmol/L之间
引物过长可能提高退火温度
G+C的含量应在45%~55%之间
两条引物的Tm值相差尽量大
尽量避免引物二聚体的出现

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