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基因工程原理
- 用于防止DNA自身环化的工具酶是（ ）。
可被（ ）诱导启动。- 标志着基因工程诞生的，世界上第一个成功的基因工程实验是（ ）。
- 在
诱导的大肠杆菌转化法中，热激的温度与时间常用（ ）。 - 1988年，加拿大Alberta省发现一种Canola油菜中含有抗草甘膦、抗固沙草、抗咪唑啉类除草剂等特性，这是转基因作物导致（ ）的典型案例。
- 全球第一家生物技术公司是（ ）。
- 某位科学家利用基因工程的方法，使马铃薯富含某一活性多肽。以下关于该基因工程操作的叙述，错误的是（ ）。
- 在蓝白斑筛选系统中，需要加入IPTG和X-gal，其中X-gal的作用是（ ）。
- 关于CRISPR-Cas打靶系统的说法，错误的是（ ）。
- 基因工程中的质粒载体往往带有一个抗生素抗性基因，其作用是（ ）。
- T-A克隆法主要适用于（ ）扩增的PCR产物。
转基因作物中，常用的抗虫基因为（ ）。
- 碱性磷酸酶的作用机理是（ ）。
- ”Golden Gate”克隆法中实现“无缝”连接的工具酶是（ ）。
- 关于cDNA说法正确的是（ ）。
- 下列哪项不能作为基因工程中的载体？（ ）
- 在基因工程中，lac启动子的诱导剂常用（ ）。
- 基因工程是在DNA分子水平上进行设计加工的。下面的操作，不需要进行碱基互补配对的是（ ）。
- 下列核酸分子杂交方法中，（ ）可以用于检测外源基因是否进行了表达。
- 转基因克隆绵羊“波莉”，是通过（ ）方法获得的转入人凝血因子IX的转基因动物。
- 蓝白斑筛选中，阳性克隆的颜色应该为（ ）。
- II型限制性核酸内切酶可以特异性地识别（ ）。
图中的质粒，可用哪一类抗生素进行阳性克隆筛选？（ ）
- 酵母表达系统中自主复制型质粒载体，不含有的元件是（ ）。
- 大肠杆菌表达系统中，目的蛋白置于（ ）序列的下游能够实现分泌表达。
- 基因工程中，常用的大肠杆菌受体菌株有（ ）。
- 构建基因组文库常用载体可以是（ ）。
- 影响限制性核酸内切酶酶切反应的主要因素有（ ）。
- Northern blot、Southern blot的区别在于（ ）。
- 在核酸杂交中，非放射性标记探针应用最为广泛，其中非放射性标记物有（ ）。
- 与一代测序技术相比，二代测序技术的优势在于（ ）。
- 二代测序技术的典型代表是焦磷酸测序技术和Solexa测序技术，两者共同的特点是（ ）。
- 下列属于基因工程的应用案例的是（ ）。
- 通常所说的“一代测序技术”是指（ ）。
- 新一代的基因编辑技术，如锌指核酶基因敲除技术和TALEN基因编辑技术，与传统基因敲除技术相比的优势在于（ ）。
- 在构建重组质粒时，我们通过根据质粒上的多克隆位点来选择两种限制性核酸内切酶进行双酶切，需要注意的是（ ）。
- 作为哺乳动物表达系统中的病毒载体，需具备的条件包括（ ）。
- 基因工程中，常用的克隆载体有（ ）。
- 利用遗传表型筛选和鉴定重组DNA分子的方法有（ ）。
- 原核表达载体，除了具备与克隆载体相同的复制子、多克隆位点和筛选标记之外，还必须具备基因表达的调控序列，包括（ ）。
- DNA分子在进行琼脂糖凝胶电泳时，其电泳方向是从正极到负极。（ ）
- 完全基因敲除技术中，外源已突变的基因通过随机重组的方式替换掉内源的正常同源基因，所以效率较低。（ ）
- DNA的结构和纯度不会影响酶切反应的效果。（ ）
- 原核生物基因的转录产物为多顺反子，真核生物基因的转录产物为单顺反子。（ ）
- 大肠杆菌表达系统中，常用的菌株大多经过基因改造，并不是天然菌株。（ ）
- 无论是完全基因敲除技术，还是条件基因敲除技术，都依赖于胚胎干细胞，所以操作上都很繁琐，且费时费力费钱。（ ）
- 真核表达载体与原核表达载体，在组成元件上没有区别，均由启动子、终止子和核糖体结合位点组成。（ ）
- 巴斯德毕赤酵母是常用的酵母表达细胞，而其表达载体可以是整合型质粒载体，也可以是自主复制型质粒载体。（ ）
- 末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）的作用是切除DNA双链中突出的寡核苷酸。（ ）
- 真核生物的基因调控通常需要增强子来提高基因转录的效率，其一般位于启动子上游不远的地方。（ ）
A:碱性磷酸酶 B:末端脱氧核苷酸转移酶 C:Klenow大片段酶
答案:T4-DNA连接酶;大肠杆菌连接酶AI参考:用于防止DNA自身环化的工具酶是末端脱氧核苷酸转移酶。末端脱氧核苷酸转移酶是一种DNA聚合酶，它可以催化两个DNA片段之间的DNA链延伸，从而形成DNA连接。这种酶可以用于在DNA片段之间形成磷酸二酯键，从而将两个DNA片段连接起来，防止它们形成环状结构。因此，正确答案是B：末端脱氧核苷酸转移酶。'
A:乳糖 B:特定温度 C:色氨酸
AI参考:选项A正确。图片内容被诱导启动的条件是需要提供触发信息，因此色氨酸为启动物可以被其诱导启动，BCD均为错误的诱导因素。所以，答案是C:色氨酸。'
A:Cohen和Boyer构建了重组DNA分子，并成功转化大肠杆菌。 B:汉密尔顿发现II型限制性核酸内切酶。 C:Nirenberg破译遗传密码。
答案:猿猴病毒SV40DNA;λ噬菌体的DNAAI参考:正确选项：A：Cohen和Boyer构建了重组DNA分子，并成功转化大肠杆菌。基因工程诞生于20世纪70年代，第一个成功的基因工程实验是由美国科学家科恩（S. Cohen）和贝纳德（T.J. Boyer）构建了重组DNA分子，并成功转化大肠杆菌。这个实验标志着基因工程的诞生，为生物科学领域带来了革命性的变革。因此，选项A是正确答案。选项B描述的是核酸内切酶的发现，选项C描述的是遗传密码的破译，虽然这些工作在基因工程领域中也具有重要意义，但它们都不是标志着基因工程诞生的第一个成功实验。'
A:40℃，90 sec； B:37℃，60 sec； C:42℃，90 sec； D:42℃，60 sec；
答案:42℃90sAI参考:正确选项是【D:42℃，60 sec；】。在诱导大肠杆菌转化法中，热激的温度和时间是两个重要的参数。通常选择42℃作为热激温度，因为这是大肠杆菌的适宜生长温度。而热激的时间通常在60秒左右，因此选项D（42℃，60 sec）是正确的答案。需要注意的是，具体的热激时间和温度可能会因实验条件和具体操作而略有不同。'
A:生物多样性被破坏 B:基因漂移 C:影响食物安全
AI参考:答案是B：基因漂移。这个案例中，转基因油菜含有多种抗性基因，这些抗性基因可能会随着花粉的传播而发生基因漂移，影响其他生物的基因多样性。因此，这个案例是基因漂移的典型案例。选项A和C不是这个案例的主要影响，因此不是正确答案。'
A:Genentech B:Thermofish C:IBM
答案:对
A:这位科学家可能是利用农杆菌Ti质粒介导法来制备的转基因马铃薯。 B:将编码活性多肽的DNA显微注射入马铃薯的叶肉细胞。 C:活性多肽的基因序列可来源于任何其他生物体。 D:这个马铃薯可以被称为植物生物反应器。
答案:采用反转录的方法得到的目的基因有内含子AI参考:C选项“活性多肽的基因序列可来源于任何其他生物体。”是错误的。基因工程中，基因序列通常来源于特定的生物体，如本题中的马铃薯。基因序列不能直接来源于其他生物体，而需要通过特定的方法如基因克隆和转化来获得。因此，正确答案是C：活性多肽的基因序列可来源于任何其他生物体。A选项：农杆菌Ti质粒介导法是一种常用的基因转移方法，可以用于植物基因工程中，将外源基因导入植物细胞。因此，这位科学家可能是利用农杆菌Ti质粒介导法来制备的转基因马铃薯。B选项：将编码活性多肽的DNA显微注射入马铃薯的叶肉细胞，这是一种常用的将外源基因导入植物细胞的方法。D选项：这个马铃薯可以被称为植物生物反应器，这是对的，因为马铃薯可以通过基因工程生产出含有活性多肽的产品。总结答案：C.活性多肽的基因序列可来源于任何其他生物体。'
A:催化剂 B:诱导剂 C:显色剂
AI参考:在蓝白斑筛选系统中，需要加入IPTG和X-gal，其中X-gal的作用是显色剂。X-gal是一种蓝色素，可以在特定的条件下被IPTG激活，从而改变细菌的颜色，便于筛选。因此，选项C“显色剂”是正确答案。而催化剂和诱导剂都不是X-gal的主要作用，因此选项A和B都不正确。'
A:Cas为核酸酶，切割CRISPR序列。 B:CRIPSR-Cas打靶技术，实现了在任意物种中任意改造DNA。 C:CRISPR名为成簇的规律间隔的短回文重复序列。 D:CRISPR中的间隔序列来源于噬菌体。
A:提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B:鉴定目的基因是否导入 C:增加质粒分子的分子量
AI参考:基因工程中的质粒载体往往带有一个抗生素抗性基因，其作用是鉴定目的基因是否导入。这是因为当目的基因导入受体细胞后，可以通过抗生素的选择来确定是否成功导入。在含有抗性基因的受体细胞中，如果目的基因成功导入，则该细胞可以继续生存，如果没有成功导入，则会被抗生素杀死。因此，正确答案是B：鉴定目的基因是否导入。'
A:Klenow大片段酶 B:逆转录酶 C:Taq DNA聚合酶 D:Pfu DNA聚合酶
AI参考:正确答案是C：Taq DNA聚合酶。T-A克隆法即TA克隆技术，适用于进行目的片段两端分别标记有接头序列的PCR产物进行克隆的PCR方法，由于该法以具有T-A依赖性的DNA聚合酶（Taq DNA聚合酶）为主酶，在延伸时并不要求起始序列带有完整的腺苷酸残基，故选C。而逆转录酶不能直接扩增，因此排除B；Klenow大片段酶和Pfu DNA聚合酶均不能用于TA克隆法扩增的PCR产物。以上仅供参考，建议查阅相关文献资料获取更多信息。'
A:EPSPS基因 B:Bar基因 C:Cry基因
AI参考:正确答案是C:Cry基因。Cry基因是杀虫晶体蛋白基因，可以产生一种特殊的蛋白质，这种蛋白质对昆虫具有毒性，能够吸引昆虫前来取食，并对其造成伤害，从而起到抗虫作用。因此，Cry基因是转基因作物中常用的抗虫基因。而EPSPS基因是编码磷酸烯醇丙酮酸硫激酶的基因，Bar基因是抗除草剂基因，它们不是常用的抗虫基因。'
A:催化DNA链的5’-P与另一条DNA链的3‘-OH形成磷酸二酯键 B:催化DNA去除3‘端的羟基 C:催化DNA去除5’端的磷酸基团
A:Cre重组酶 B:IIs型限制性核酸内切酶 C:II型限制性核酸内切酶
AI参考:正确答案是A:Cre重组酶。Golden Gate克隆法是一种基于同源重组的基因克隆方法，其中需要用到一种名为Cre重组酶的工具酶来实现“无缝”连接。因此，答案为A选项，即Cre重组酶。B选项IIs型限制性核酸内切酶和C选项II型限制性核酸内切酶都是用于基因切割的工具酶，与Golden Gate克隆法中的“无缝”连接无关。'
A:含有内含子 B:是与mRNA互补，在体外合成的DNA C:存在于生物体的细胞核中
A:细菌基因组DNA B:噬菌体 C:动植物病毒 D:细菌质粒
A:乳糖 B:X-gal C:IPTG D:半乳糖
AI参考:正确答案是C：IPTG。IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）是常用的lac启动子的诱导剂。乳糖是lacZ的诱导物，不是启动子的一部分。X-gal是β-半乳糖苷酶的底物，不是启动子的一部分。半乳糖虽然是葡萄糖的同分异构体，但不是lac启动子的诱导剂。'
A:将重组DNA分子导入受体细胞 B:目的基因与载体相连 C:人工合成目的基因
A:Northern blot B:原位菌落杂交 C:Southern blot D:Western blot
AI参考:正确答案是C：Southern blot。Southern blot可以用于检测外源基因是否进行了表达，因为它可以检测到转基因生物中是否含有转基因的特异DNA序列。其他选项中，Northern blot用于检测转录水平，Western blot用于检测蛋白质表达水平，原位杂交主要用于基因定位和突变检测，与检测外源基因是否表达无关。因此，答案为C。'
A:胚胎干细胞介导法 B:逆转录病毒感染法 C:体细胞克隆法
AI参考:单选题】转基因克隆绵羊“波莉”，是通过（ ）方法获得的转入人凝血因子IX的转基因动物。答案：C:体细胞克隆法。体细胞克隆法是一种通过核移植和胚胎移植技术，将基因转入体细胞，进而培育成转基因动物的方法。本题中，通过转基因克隆绵羊“波莉”可以判断出答案为C。'
A:蓝色 B:黄色 C:白色
A:双链DNA的特定碱基序列 B:DNA形成的特定空间结构 C:特定蛋白质结构
A:氨苄青霉素 B:卡那霉素 C:新霉素 D:四环素
AI参考:正确答案是D：四环素。根据图中的质粒结构，该质粒具有四环素的抗性基因，因此可以用四环素进行阳性克隆筛选。其他选项中，氨苄青霉素、卡那霉素和新霉素都不是该质粒的抗性基因，因此不能用于阳性克隆筛选。'
A:多克隆位点 B:整合介导区 C:标记基因 D:酵母DNA复制起始区
AI参考:正确答案是A：多克隆位点。酵母表达系统中自主复制型质粒载体需要含有酵母DNA复制起始区以便于在酵母细胞中自主复制，也需要整合介导区以便于整合到染色体的特定位置，标记基因可以用于选择重组后的重组子，酵母细胞含有多种复制原点，可供载体复制使用，但是不需要多克隆位点。因此，本题答案为A。'
A:启动子 B:增强子 C:融合蛋白 D:原核蛋白信号肽
AI参考:正确答案是D：原核蛋白信号肽。在大肠杆菌表达系统中，目的蛋白置于原核蛋白信号肽序列的下游能够实现分泌表达。原核蛋白信号肽是一种引导蛋白质进入大肠杆菌等原核细胞内部的信号序列，它能够指导蛋白质进入内质网和高尔基体等细胞器，并最终被分泌到细胞外。其他选项中，启动子是调控基因转录的重要元件，增强子可以增强基因的表达，但它们不能实现分泌表达。因此，答案为D。'
A:JM101 B:TOP10 C:BL21（DE3） D:
A:质粒 B:噬菌体 C:柯斯质粒 D:人工染色体
A:酶切体积 B:星号活性 C:酶切温度 D:缓冲体系
A:实验操作流程不同 B:研究对象不同，分别为RNA和DNA C:在基因工程中，两者检测的内容和意义不同
A:生物素 B:地高辛 C:荧光素
AI参考:正确答案是ABCD。在核酸杂交中，生物素、地高辛、荧光素、异硫氰酸荧光素（FITC）等非放射性标记物都被广泛使用。这些物质都可用于探针标记，使得杂交反应具有高特异性和灵敏度，并且操作简单。需要注意的是，生物素主要用于链霉亲和素系统，而地高辛和荧光素等物质主要用于荧光标记系统。因此，ABCD都是正确选项。'
A:耗时短 B:高通量 C:分辨率高
A:利用荧光信号即时检测 B:边合成边测序 C:单分子测序，精度更高
AI参考:正确答案是AB。二代测序技术的典型代表是焦磷酸测序技术和Solexa测序技术，两者共同的特点是边合成边测序，同时利用荧光信号即时检测。因此，选项A和B是正确的。选项C“单分子测序，精度更高”是下一代测序技术如纳米孔测序、单分子实时测序等的特点。'
A:重组人胰岛素的研制 B:构建超量表达PHB（聚3-羟基丁酸酯）的大肠杆菌 C:抗氨苄青霉素的大肠杆菌。
AI参考:正确选项为：A:重组人胰岛素的研制 C:抗氨苄青霉素的大肠杆菌。基因工程的应用案例包括生产人类所需的蛋白质药物、疫苗或用于农牧业生产抗生素等，其中A选项重组人胰岛素的研制和C选项抗氨苄青霉素的大肠杆菌都是应用案例之一。B选项构建超量表达PHB（聚3-羟基丁酸酯）的大肠杆菌不属于基因工程的应用案例，它是利用基因工程技术对生物体内的基因进行改造，提高PHB（聚3-羟基丁酸酯）合成酶的产量，使其生产量增加的一种应用技术。因此，A和C是正确的。'
A:Sanger双脱氧末端终止法 B:单分子测序 C:Maxam-Gilbert法 D:454测序技术
AI参考:通常所说的“一代测序技术”是指Sanger双脱氧末端终止法，因此选项A是正确答案。Sanger双脱氧末端终止法是一种经典的测序方法，被广泛用于基因组测序和遗传学研究中。该方法通过在DNA模板上延伸特异性引物，并使用双脱氧核糖取代终止核苷酸，从而停止延伸。该方法具有较高的测序精度和通量，是当前最常用的测序技术之一。其他选项B、C、D虽然都是新一代测序技术，但它们不属于“一代测序技术”。单分子测序和454测序技术属于新一代测序技术中的代表性技术，但它们不属于“一代测序技术”。因此，正确答案是A：Sanger双脱氧末端终止法。'
A:实现了“自由编程”，可识别任意DNA靶序列。 B:不依赖于同源重组，因而打靶更高效。 C:不受胚胎干细胞的限制，因而更加省时省力，技术上要求也更低一些。
A:两个酶的酶切位点一定不能存在于目的基因内部。 B:两个酶最好有一致的酶切反应条件。 C:两个酶的酶切位点一定要同时存在于目的基因内部，不然怎么切！ D:两个酶切位点不应该相距太近。
AI参考:在构建重组质粒时，通过根据质粒上的多克隆位点来选择两种限制性核酸内切酶进行双酶切，需要注意以下两点：A. 两个酶的酶切位点一定不能存在于目的基因内部。这是因为如果酶切位点存在于目的基因内部，会导致目的基因断裂，从而使得重组后的质粒难以稳定存在，并且可能导致目的基因在重组过程中丢失。B. 两个酶最好有一致的酶切反应条件。这是因为如果酶切反应条件不一致，可能会导致酶切效率不同，从而影响重组质粒的构建效率和质量。因此，正确选项为：A. 两个酶的酶切位点一定不能存在于目的基因内部；B. 两个酶最好有一致的酶切反应条件。'
A:携带外源基因并能包装成病毒颗粒。 B:能够介导外源基因的转移和表达 C:对机体不致病
AI参考:作为哺乳动物表达系统中的病毒载体，需具备的条件包括（ABC ）。A：携带外源基因并能包装成病毒颗粒。病毒载体需要能够包装病毒颗粒，携带外源基因进入宿主细胞，并表达出外源基因。B：能够介导外源基因的转移和表达。病毒载体需要能够将外源基因转移到宿主细胞中，并且能够在细胞内表达出外源基因。C：对机体不致病。病毒载体需要不对机体造成危害或产生毒性，避免引起疾病或损害。D选项是对于细菌表达系统的要求，因此不包括在哺乳动物表达系统中病毒载体的条件。所以答案是（ABC）。'
A:pUC系列载体 B:人工染色体载体 C:pET系列载体 D:M13丝状噬菌体载体
A:蓝白斑筛选 B:根据目的基因的分子量判断 C:抗药性筛选
AI参考:利用遗传表型筛选和鉴定重组DNA分子的方法有A和C。A、蓝白斑筛选是利用重组DNA分子中插入的外源DNA片段对乳糖操纵子的终止，导致lacZα失活，从而在培养基上形成不同的斑点，通过识别不同斑点的颜色可以筛选出含重组分子的克隆。C、抗药性筛选也是根据插入的DNA片段的遗传表型。通常用于插入抗药性基因的重组DNA分子的筛选和鉴定。因此这两个选项都是正确答案。B选项是不正确的，因为重组DNA分子的鉴定主要依赖于分子量的变化，而不是通过肉眼观察判断的。因此，本题的正确答案是A和C。'
A:增强子 B:核糖体结合位点 C:启动子 D:转录终止子
AI参考:正确答案是：C:启动子 D:转录终止子。原核表达载体除了具备与克隆载体相同的复制子、多克隆位点和筛选标记之外，还必须具备基因表达的调控序列，包括启动子、转录终止子等。因此，C、D选项正确。增强子和核糖体结合位点属于启动子的一部分，不是原核表达载体所必需的。因此，A、B选项错误。所以本题答案为C、D。'
A:错 B:对
A:对 B:错
AI参考:正确答案是B：错。 完全基因敲除技术中，外源已突变的基因通过随机重组的方式替换掉内源的正常同源基因，因此其效率较高。这是因为基因敲除技术能够高效地识别和替换特定的基因片段，并且能够在基因组中广泛地进行操作，从而实现大规模的基因改造。因此，本题错误。"
A:对 B:错
AI参考:B:错。DNA的结构和纯度对酶切反应的效果有重要影响。DNA的结构需要保持线性，不能有交叉或扭曲，否则会影响酶切反应的效果。同时，DNA的纯度越高，酶切反应的效果也越好，因为纯的DNA分子结构更稳定，不容易受到其他杂质的影响。因此，DNA的结构和纯度都会影响酶切反应的效果。"
A:对 B:错
A:错 B:对
AI参考:答案是B：对。 大肠杆菌表达系统中，常用的菌株大多经过基因改造，并不是天然菌株。这是因为大肠杆菌是一种常用的表达载体，可以通过基因工程手段对其进行改造，以适应不同的表达需求，如提高表达效率、降低毒性等。因此，大肠杆菌表达系统中使用的菌株大多经过基因改造，而不是天然菌株。"
A:对 B:错
AI参考:答案是B:错。 判断题中所述不正确。虽然胚胎干细胞在基因敲除技术中起到了关键作用，但并不是所有的基因敲除技术都需要依赖胚胎干细胞，如组织特异性基因敲除等。此外，基因敲除技术也有一些自动化和快速的方法，操作上相对简单。因此，操作上并不是很繁琐，费时费力费钱的说法也是不准确的。所以答案是B，错误。"
A:对 B:错
AI参考:正确答案是B：错。 真核表达载体与原核表达载体在组成元件上有显著的区别，真核表达载体除了启动子、终止子和核糖体结合位点外，还包含复制起始位点、复制元件、内含子、转录终止位点等，而原核表达载体则缺少这些元件。因此，二者在组成元件上存在显著差异。"
A:错 B:对
A:错 B:对
AI参考:正确答案是B：对。末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）的作用是催化合成长链的寡核苷酸链。其可以将底物TP等插入到DNA链的3末端，生成具有黏性末端的DNA片段，即用于连接DNA片段的“粘合剂”。因此，末端脱氧核苷酸转移酶的作用是切除DNA双链中突出的寡核苷酸的说法是正确的。"
A:错 B:对
AI参考:答案：B:对。 真核生物的基因调控通常需要增强子来提高基因转录的效率，其一般位于启动子上游，但不能说“不远的地方”。增强子可以延长基因转录的效率，从而调控蛋白质的合成和细胞周期。"
